La fertilidad potencial de una muestra de semen probablemente va a depender de que contenga un número suficiente de espermatozoides viables, morfológicamente normales y funcionalmente competentes, capaces de alcanzar el oviducto y de establecer un reservorio oviductal, de llevar a cabo la fecundación del ovocito, y de contribuir al desarrollo embrionario. La evaluación del semen mediante técnicas in vitro, si ha de tener algún valor predictivo de su capacidad fecundante in vivo, debería incluír el estudio de tantas características espermáticas como sea posible, especialmente cuando se trata de dosis de semen congelado o cuando se están evaluando nuevos métodos de criopreservación. Los nuevos sistemas computerizados para el análisis de la motilidad y de la morfometría espermática, junto con las tecnologías de fluorescencia, permiten adquirir, de forma rápida y objetiva, datos precisos sobre múltiples parámetros relativos a características estructurales y funcionales de los espermatozoides. Además, el uso de tests basados en la fecundación in vitro (FIV) permite obtener una valiosa información sobre la capacidad de los espermatozoides para reconocer e interaccionar con los ovocitos. En el presente artículo se revisan, aunque no de forma exhaustiva, algunas de las metodologías aplicables in vitro para valorar la capacidad fecundante del semen bovino, atendiendo al estudio de algunos atributos espermáticos que son útiles para valorar su capacidad funcional.