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Identificación del sexo a partir de muestras biológicas de diferente origen mediante amplificación selectiva de ADN y posterior análisis de RFLPs


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Autores: M. Villalta Martín, J.L. Alabart Álvarez, J. Folch Pera
Volumen: 92A-2 (93-114)
Tipo de Artículo: Producción Animal
Palabras Clave: PCR, ZFX/ZFY, sexaje, sangre, tejidos, células bucales, pelos, pUC18
Resumen:

Una de las principales limitaciones para la tipificación genética de individuos es la cantidad de ADN presente en la muestra biológica de partida, así como su estado de conservación. En el presente trabajo se compara la eficiencia de diferentes métodos para la extracción de ADN a partir de muestras biológicas de diferente origen y en diferente estado de conservación. La metodología que se describe posibilita la caracterización genética de individuos mediante tecnología PCR ("Polimerase Chain Reaction") a partir de muestras biológicas limitantes o no en contenido de ADN: san­gre, tejidos, células bucales y pelos. Asimismo, se ha realizado un estudio del impacto del agente conservante utilizado (etanol o formol) sobre la integridad del ADN de muestras biológicas archivadas procedentes de museos e institutos anatomo‑patológicos, y en última instancia, su aptitud para el análisis.
El ejemplo particular que presentamos es la identificación del sexo mediante la amplificación de los loci ZFX/ZFY y posterior análisis de RFLPs ("Restriction Fragment Length Polimorphisms") en diferentes mamíferos. Sin embargo, esta técnica de sexaje a veces presenta problemas para el diagnóstico del sexo en rumiantes, por lo que es frecuente incurrir en una falsa asignación del sexo. Para mejorar la precisión de esta técnica hemos introducido un "control interno" en el análisis de RFLPs que proporciona un inequívoco diagnóstico del sexo: el vector plasmídico pUC18.

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